版权所有©北京阿匹斯生物科技有限公司

京ICP备:11041562

                            中企动力  北京​​

DNA酶I

基本信息
所属分类:
酶及辅酶
英文名称
DNase I
缩写
DNase I
货号
AA0101A
规格
规格可定制
浏览量
没有此类产品
我要询价
产品描述

 

 

一、产品介绍

    观:

白色无定形粉末或无色透明液体

蛋白比活:

≥20,000 Kunitz units/mg protein

    度:

不含RNase、蛋白酶、其它DNA内切酶和外切酶;≥95%(SDS-PAGE)

性:

-20至少稳定2

量:

~35kD的糖蛋白

点:

6.0左右

剂:

EDTA EGTASDSDTT、β-巯基乙醇等还原剂

剂:

Mg2+Mn2+Ca2+Co2+

pH稳定性

4.0-9.02524h

最适 pH

6.0

最适温度:

活力随温度(20-60℃)升高逐渐升高;37℃测值为25℃测值的3.3倍。

热稳定性:

55以下稳定;60℃加热30min后活力依然保留50%以上;70℃以上失活。。

二、酶活测定方法

1.     原理

利用DNase降解DNA生成寡核苷酸时260nm处的吸光值会升高的原理,在一定条件下,OD260每分钟的增加率与DNase的含量成正比例。以牛胸腺DNA为底物,在pH5.025℃条件下,1Kunitz unit能使OD260每分钟增加0.001

2.     活试剂

2.1 1M 醋酸钠缓冲液 (pH 5.0):将13.6g醋酸钠溶于80ml去离子水,再用6M HClpH 5.025℃),加去离子水定容至100ml,室温保存。

2.2 100mM MgSO4:将1.2g MgSO4溶于100ml去离子水,室温保存。

2.3 0.033% (W/V)小牛胸腺DNA

1)将100mg 小牛胸腺DNA(欣经科 货号:7026)溶于300ml预冷的去离子水中,冰浴至少30min,缓慢搅拌至完全溶解。分装后,冻存于-20℃。临用前在37℃解冻。

2测定DNA的浓度

a. 去离子水将1.1.3底物DNA样品稀释N倍(10-30倍),以去离子水作为阴性对照。

b. UV分光光度仪测定OD260以阴性对照归零。

c.  1OD260单位相当于50μg/ml DNADNA浓度的计算公式如(1.1)。

         (1.1)

2.4 酶稀释液:即0.85% NaCl150mM)。0.85g NaCl溶于100ml去离子水,室温保存。

2.5 反应液R

    1)按下表配置50ml 反应液R

    2)轻柔混匀后,用0.1M HCl0.1M NaOHpH 5.0 (25ºC)2-8℃可稳定保存至少2个月。

3*注意:根据4.3测得的DNA浓度适当添加去离子水和底物DNA。测活试剂RDNA的终浓度为0.004%(w/v) ,即40ug/mlOD260吸光值为0.8

   

ml

1M 醋酸钠(pH 5.0)

5.0

100mM MgSO4

2.5

0.033% (W/V)小牛胸腺DNA

6.0* (2.0mg of DNA)

去离子水

36.5*

1.     测样品的配制

测活前,用酶稀释液溶解重组型bpDNase I干粉后,再用酶稀释液将酶液稀释至200-500 Kuniz units/ml,按以下步骤检测酶活。

2.     活检测步骤

1cm的石英比色杯中加入2.5ml 2.2.2测活试剂R25℃条件下保温1.5min后,加0.5ml待测样品,迅速混匀,在260nm波长下读取2min内最大的吸光度变化率(ΔA260nm/min Sample)。同时以0.5ml去离子为空白对照,记录ΔA260nm/min Blank。按照以下公式计算酶活力。线性范围是400-500U/ml3.00ml反应体系含83mM 醋酸钠缓冲液(pH5.0)4.2mM MgSO425mM NaCl33.33ug/ml小牛胸腺DNA200-250 Kuniz units DNase I酶活力计算公式:

ActivityKunitz Units/ml= (ΔA260nm/min Sample -ΔA260nm/min Blank) X (3) X D =A/min×6000×D

0.001×0.5×1

Vt

反应液总体积 3ml

ε

0.001 = ΔA 260nm per the unit definition

Vs

样品体积  (0.5ml)

d

比色皿光程  (1cm)

D

稀释倍数

A/min

A/min Sample A/min Blank(单位:Abs/min

 

 三、酶性质

下一条
鸡心乳酸脱氢酶(L-LDH)